(текст мовою оригіналу)

Как известно, некоторые заболевания пчел вызываются вирусами: вирусом мешотчатого расплода (поражает пчелиный расплод), вирусом хронического паралича (черная бопезнь) и вирусом острого паралича (неявная инфекция пчел). В последние годы выделено еще несколько вирусов: Арканзас-вирус, х-вирус, вирус медленного паралича, вирус Нодамура и ряд других. Все они изучены недостаточно и роль их в патологии пчел не ясна.

Мешотчатый расплод и хронический паралич пчел – давно известные заболевания, наносящие иногда значительный ущерб пасекам.

Вирус острого паралича был открыт в лабораторных опытах путем инъекции безбактериального фильтрата из внешне здоровых пчел другим внешне здоровым пчелам (Л. Бейли, А. Гибс, 1963). В некоторых случаях этот вирус был выделен из организма пчел при многократных пассажах вируса хронического паралича (Б. В. Зюман, В. П. Юрова, 1976). Физические, химические и биологические свойства вируса изучали А. Жоффре, 1969; И. Нексман, Ф. Браун, Л. Бейли, А. Гибс, 1973 и другие авторы. Роль вируса острого паралича в патологии пчел в естественных условиях не изучена, хотя открыт он сравнительно давно (1963 r.).

Острый паралич считается лабораторным феноменом, латентной инфекцией, которая проявляется у пчел только при введении им в гемолимфу чужеродных белков. Лишь совсем недавно в одной из работ Л. Бейли (1975 г.) появилось краткое замечание, в котором он большую гибель пчел поздней зимой и ранней весной объясняет появлением именно этого вируса.

Выделение вируса

Летом 1978 г. в лабораторию привезли пакет пчел на исследование. Позднее поступил еще ряд проб пчел из различных хозяйств. С 1976 г. в некоторых районах наблюдалась гибель пчелиных семей, которую связывали с варроатозом. Однако некоторые пчеловоды были не согласны с этим диагнозом. Характерным признаком заболевания был выход пчел, особенно молодых, из улья и массовая их гибель. Покинувшие улей пчелы теряли способность к полету.

Привезенные в лабораторию пчелы были помещены в изолированный улей, в естественные условия, и за ними установили наблюдение. Ежедневно возле летка появлялись больные пчелы. Тело их не было лишено волосков и не казалось почерневшим, как это бывает при хроническом параличе. Единственным признаком заболевания была потеря способности к полету.

При постановке биопробы оказалось, что пчелы поражены вирусной инфекцией. Штамм вируса паралича, выделенного из этих пчел, оказался очень вирулентным, с коротким инкубационным периодом. При введении этого штамма пчелам методом микроинъекции в разведениях до 10-3 получен стабильный результат: пчелы гибли через сутки. При более высоких разведениях гибель растягивалась на 2-3 сут. Пчелы в контроле, которым вводили суспензию из здоровых пчел в тех же разведениях, оставались живыми более 20 сут. При титровании на пчелах вирус проявлял активность в разведениях до 10-9

По литературным данным инкубационный период при инъекции вируса хронического паралича составляет 5-6 суток, а при инъекции вируса острого паралича 2-3 суток.

Для электронно-микроскопического исследования погибших и ползающих вокруг улья больных пчел собрали, растерли с дистиллированной водой и четыреххлористым углеродом. Грубые частицы удалили центрифугированием на низких оборотах.

Дальнейшую очистку суспензии проводили при 8000 g в течение 20 мин. Вирус осаждали при 100 000 g в течение 1,5 ч на ультрацентрифуге. Осадок, содержащий вирус, ресуспендировали в фосфатном буфере.

Концентрированную и частично очищенную суспензию наносили на сеточки и окрашивали фосфорно-вольфрамовой кислотой (метод негативного контрастирования).

При инструментальном увеличении (30-40 тыс.) было обнаружено множество сферических вирусных частиц размером 30 ± 2 нм. Среди вирусных частиц часто встречаются пустые оболочки вирусов, образовавшиеся, видимо, в результате дифференциального осаждения с высоким линейным ускорением, толщина этих оболочек составпяет 3 ± 0,5 нм.

Морфологически выделенный вирус резко отличается от вируса хронического паралича, его строение и размеры совпадают со строением и размерами вируса острого паралича, описанного Бейли и другими авторами.

Так как материал для электронной микроскопии был взят непосредственно из улья без дальнейших пассажей на пчелах, то ни о каком лабораторном феномене не может быть и речи.

Как известно, вирус острого паралича в лабораторных условиях пассируют на пчелах методом микроинъекции.

Другими методами, такими, например, как скармливание, перезаразить пчел очень трудно.

Поскольку вирусная инфекция протекала в естественных условиях на фоне варроатоза, то для проверки возможности переноса вируса клещом Varroa jacoвsoni (1904) в садок отобрали пчел, несущих на себе 1-3 самки. Каждую пчелу инъецировали вирусосодержащей суспензией в разведении 10-3.

На следующий день с погибших или полностью парализованных пчел клещей снимали и тут же пересаживали на здоровых пчел по два на каждую. В контроле пчелам подсаживали клещей, снятых с других здоровых пчел.

Пчелам скармливали чистый сахарный сироп. Параллельно поставили опыт по скармливанию пчелам сиропа, в который была подмешана вирусосодержащая суспензия в соотношении 1:10.

В контроле в сироп пчелам добавляли суспензию из здоровых пчел в том же соотношении. Во всех случаях вирусосодержащая суспензия для заражения получена из пчел, погибших непосредственно в улье. Садки с пчелами содержали в термостате при +30° С, наблюдение вели в течение 20 сут.

Было поставлено три серии опытов. В. каждом опыте и в каждом контроле использовали в сумме по 140 пчел. В каждой серии опытов получили аналогичные результаты.

На 4-7 сутки среди пчел, которым были подсажены инфицированные клещи, наблюдали резкое повышение степени их гибели.

Среднесуточный отход в эти дни составлял в среднем 19-20 пчел. Около 8,6% пчел оставались здоровыми на протяжении всех 20 суток наблюдения. В. контроле погибало в среднем всего 2-3 пчелы в сутки, более 60% пчел остались живыми до конца опыта.

Среди пчел, которым· скармливали вирусосодержащую суспензию, также наблюдали повышенную степень гибели, но она была не так сильно выражена и растянута от З до 10 сут. Среднесуточный отход в эти дни составлял соответственно 11-12 пчел в опыте и 3-4 пчелы в контроле. К концу эксперимента около 11 % пчел в опыте и более 50% пчел в контроле оставались живыми,

В результате проведенной работы выделен вирус, вызывающий массовую гибель пчел на пасеках и морфологически сходный с вирусом острого паралича. Установлено, что клещ Varroa jacoвsoni может служить переносчиком вирусной инфекции среди пчел.

Источник: Журнал “Пчеловодство”, № 7, 1979 рік, с. 10-11